BETAGENE 全能核酸酶

启用核酸酶靶向降解新方式

全能核酸酶BETAGENE®-ProNuclease是来源于Serratia Marcescen（粘质沙雷氏菌）的非特异性核酸内切酶，可在链内任意核苷酸间进行切割，将核酸完全消化成2-5个碱基长度的5'-单磷酸寡核苷酸，能够在非常广泛的条件下降解各种形式的（双链，单链，线状，环状，天然或变性）DNA和RNA。

ProNuclease使用指南

1.   产品介绍

本品在 E.coli中 表达，分子量为 26.78 kDa，纯度 ≥ 99%（SDS-PAGE）， 比活 ≥ 1.1×10⁶ U/mg，蛋白酶活＞250U/μL，内毒素＜0.01EU/kU，可用于科学研究中降低细胞上清和细胞裂解液的粘度，提高蛋白纯化效率及功能研究，并且可以有效防止细胞治疗和疫苗研究中人外周血单核细胞（PBMC）的结团。本品储存于缓冲液（20 mM Tris-HCl，pH 8.0, 2 mM MgCl₂, 20 mM NaCl, and 50% glycerol），产品为无菌无色透明液体。

2.  不同应用的添加

• 病毒纯化：一般在病毒澄清后加入;

• 大肠杆菌重组蛋白纯化：菌体裂解时加入;

• 细胞裂解液结团：可以直接加入培养基中与细胞共培养。

3.   ProNuclease 的添加量

3.1  为了达到降低粘度的目的，加入ProNuclease全能核酸酶的用量须根据破碎液的菌体浓度来决定，如果菌体浓度在 50%，建议加入 ProNuclease 的量为 1/1000~1/200，即500~2500kU/L。如果菌体浓度在 5%，则可以按照 1/10000~1/2000 的比例加入；

3.2  对于细胞裂解液，可以按照10⁶~10⁷个细胞加入 500U ProNuclease；

3.3  对于腺病毒药物或者病毒性疫苗，根据DNA的含量，适量调整 ProNuclease 全能核酸酶添加量。

4.   ProNuclease 的添加步骤

4.1  对于为了降低粘度的目的，不需要无菌操作的可以直接加入，室温缓慢搅拌 30min。

4.2  对于有无菌要求的应用，建议将 ProNuclease 用 20 mM Tris（pH 8.0），20 mM NaCl，2 mM MgCl₂ 的 buffer 稀释，然后用 0.2μm 的膜除菌过滤后加入。室温作用 30min。

5.   ProNuclease 的去除

ProNuclease 也是一种蛋白质，如果加入到细菌或者细胞裂解液中，将会随着纯化步骤如其他杂蛋白一样被去除，如果加入到病毒或者病毒类疫苗中，由于ProNuclease全能核酸酶和病毒的分子量差异巨大，可以采用凝胶过滤的方式如sepharose 6 FF去除，ProNuclease全能核酸酶的残留量可以采用商品化的试剂盒进行检测。

ProNuclease 的残留可以通过商业化的试剂盒检测。

6.   注意事项

6.1  ProNuclease 的最佳作用条件是 pH8.0-9.2，37°C，30min。超出这个范围酶仍然有活性，只是要适当延长作用时间，或者增加酶的添加量；

6.2  镁离子对核酸酶的活性是必须的，推荐使用的浓度为2 mM，如果样品中有 EDTA 等金属螯合剂，需要去除，或者加入过量的镁离子来中和 EDTA；

6.3  ProNuclease 的活性比较稳定，室温放置短期内不会有太多影响，长时间保存须放置在-20°C冰箱内，由于保护液中含有50%甘油，所以酶液不会冻结，酶被稀释后尽快用掉，避免反复冻融。

6.4  若溶液为高盐，偏酸性或者碱含有较高浓度的去垢剂、变性剂，则应适当增加 ProNuclease 的用量或延长作用时间。

质量标准