蛋白都有哪些分类？

什么是重组蛋白？

重组蛋白是一种通过基因工程技术生产的蛋白质，其DNA序列来自于不同来源的基因，通常是来自于不同的物种。重组蛋白可以通过转化宿主细胞表达、纯化和结晶等步骤得到。

重组蛋白的应用范围非常广泛，包括制造药物、研究生命科学、生物技术等领域。比如，人类胰岛素、生长激素和白细胞介素等药物就是通过重组DNA技术制备的。此外，重组蛋白还广泛应用于疫苗制造、酶工业和基因治疗等领域。

重组蛋白的获得途径？

重组蛋白的制备需要通过基因克隆、转染、表达和纯化等一系列复杂的过程。其中，基因克隆是指将目标基因的DNA序列克隆到表达载体中，转染是指将重组表达载体导入到宿主细胞中，表达是指利用宿主细胞的生物合成机制来合成目标蛋白，纯化是指通过一系列物理和化学分离技术将目标蛋白从复杂的宿主细胞中纯化出来。

重组蛋白需要使用表达系统来对其进行制备，其获得途径可以分为体外方法和体内方法。两种方法的前提都是应用基因重组技术，获得连接有可以翻译成目的蛋白的基因片段的重组载体，之后将其转入可以表达目的蛋白的宿主细胞从而表达特定的重组蛋白分子。

体外重组蛋白的生产主要包括四大系统：原核（常用大肠杆菌）、真核（常用酵母）、哺乳动物细胞（常用CHO、HEK293）及昆虫细胞蛋白体系。合适表达系统的选择取决于重组蛋白的特性、重组蛋白的预期应用以及该系统能否生产足够量的蛋白质，根据自身的下游运用选择合适的蛋白表达系统，提高表达成功率。

重组蛋白的表达系统都有哪些？

目前应用最广泛的表达系统有三大类，大肠杆菌（Esherichia coli或E.Coli）表达系统、酵母表达系统（Pichia Pastoris或P.Pastoris）、CHO细胞表达系统。其中，大肠杆菌是表达重组蛋白最常用的宿主菌，已应用于许多具有重要药用价值蛋白的生产。大肠杆菌表达系统具有许多优点，如生长快、培养成本低廉、遗传背景清楚和易实现高密度培养等。

不同的表达系统和培养方法显著影响下游的处理过程，目标蛋白表达是否形成包涵体，目标蛋白表达的定位（胞内、细胞膜内、周质空间和胞外），蛋白表达的量都依赖于所选择的的表达系统。

BETAGENE Genetic的蛋白主要为E.Coli、P.Pastoris以及HEK293体系表达。

我可以使用BETAGENE的细胞因子进行GMP生产和商品化治疗产品的生产吗？

是的，BETAGENE Genetic提供的细胞因子可用于您的药物的研究、GMP级的生产或其他已上市的临床产品，如细胞治疗、基因治疗等。然而，BETAGENE Genetic的细胞因子产品本身并不是治疗性产品或辅药，因此不可直接用于人体。

BETAGENE的重组蛋白的内毒素水平如何？

我们提供的大部分无动物成分级别蛋白的内毒素水平均保证低于0.01 ng/µg蛋白，即0.1 EU/µg蛋白。事实上，许多蛋白的实际内毒素含量均低于上面标称的内毒素水平，具体信息请与我们的售后部门联系，我们将会提供给您准确的批次内毒素数据。

细胞因子或蛋白的外观

BETAGENE的重组蛋白产品中均不含载体蛋白或其它添加物（如BSA、HSA等），且以最低含盐量的溶液进行冻干并沉积于冻存管内，因此冻干后的蛋白并非是显眼或厚重的白色干粉，甚至黏附在管壁管盖上，形成一个很薄的薄层。虽然蛋白层很薄或者肉眼不可见，我们的生产及质控确保每管中所含的蛋白量是符合 COA 及其标识的。我们建议收到产品后按照下文『使用前注意事项』操作。

无动物成分是什么意思

BETAGENE Genetic公司的重组蛋白均为无动物成分（Animal-Free）。Animal-Free是指在独立的、无动物成分的生产车间中生产出来的，其生产过程中未使用任何动物来源的材料（例如胰蛋白胨等任何含动物成分的培养基或试剂），因此可保证最终的重组蛋白中不含任何动物成分，非常适合于临床前试验和动物研究。

重组蛋白通常是用细菌表达，而细菌培养基中需要添加胰蛋白胨（Trypton）等动物来源的组分，这些组分不可避免地导致不明的动物成分在终端产品中残留。虽然终端产品纯度可达98%或99%以上，其残留的杂质很可能就包含胰蛋白胨的动物成分。这些含量极微的成分会导致其中所含动物病原体（如疯牛病病毒及其它未知病原体）传染给人和动物。另外，这些动物成分中的异源蛋白也会引起人和动物的异体排斥或过敏反应。因此，当重组蛋白在应用过程中可能接触到人体或动物体时（如细胞治疗和动物体内实验等），请尽量选用Animal-Free的重组蛋白。

什么是"蛋白标签"？

蛋白标签（Tag）指重组蛋白制备过程中与目的蛋白融合表达的蛋白或多肽。HEROSTEM LAB的重组蛋白产品（包括重组胶原蛋白）大部分为Tag-Free，但少数重组蛋白产品因为不同目的需要加特定标签。

• 标签利于蛋白纯化；

• 当目的蛋白无特定抗体直接鉴定，可利用标签进行Western Blot或ELISA分析方法鉴定；

• Fc标签可以提升重组蛋白的半衰期以提高分子的稳定性，同时也能够促进重组蛋白形成活性二聚体。

重组蛋白标签对蛋白的生物学活性影响存在未知结论，但对大部分检测应用中，重组蛋白的标签对蛋白本身生物学活性并无影响，所以无需移除。我们对重组蛋白产品都已经做过生物学活性检测并将数据公示于CoA中。

冻干产品使用前注意事项

冻干粉产品在运输过程中会有粉末黏在管壁或盖上，使用前请勿开盖并离心处理 20-30 秒（高速离心机，约13000 rpm），使附于管盖或管壁的蛋白收集于管底。亦可使用最高转速为4000-4500rpm的离心机离心5分钟（3000-3500rpm），也能达到类似的效果。虽然有时管中蛋白粉末不可见或者可视数量很少，我们的质控体系保证每管中所含的蛋白量是准确且足量的。

产品的溶解（Reconsitution）

1. 使用前准备：

1.1 使用前先离心（见上文），使附于管盖或管壁的蛋白沉于管底；

2. 溶解液：

2.1 要求用无菌去离子水溶解的产品，务必不可用盐溶液，避免过高的盐浓度造成蛋白不可逆的析出；不可用PBS或培养液（1640或DMEM等）直接溶解，否则蛋白可能无法完全溶解，从而导致蛋白活性不足或失活；

2.2 要求用盐溶液溶解的产品，请依照说明书上的浓度，同样也是为了避免过高的盐浓度；

2.3 亦可联系我们的技术支持获得关于单独产品的溶解液的选择。

3. 溶解到指定的浓度：

3.1 我们建议最佳浓度一般不低于100 μg/mL，如10μg的冻干粉，则加入10μL-100μL的溶解液；

3.2 高于或低于最佳浓度，细胞因子可能会不稳定，或者聚集（aggregation），导致部分蛋白沉淀，影响其活性。高于这个浓度范围，可能会超过该蛋白的最大溶解浓度，即蛋白无法完全溶解；

3.2 用移液枪轻吹混匀，或将管盖盖好后轻柔颠倒数次进行混匀，低速离心数秒；溶解时不可振荡（vortex，即用涡旋仪进行快速振荡），避免因化学键的断裂造成蛋白失活；

3.3. 将溶解后的蛋白在室温放置数分钟，以保证蛋白能够充分溶解。建议将不易溶解（slow to dissolve）的蛋白用低速摇床促进其溶解。

4. 溶解后的保存：

不建议用推荐的溶解液做进一步稀释。溶液中的蛋白很容易黏附在冻存管壁，且很难与管壁分离。使用含有载体蛋白的溶液（该溶液通常是指pH近中性，有一定缓冲能力的缓冲液，如PBS，培养液等）预先封闭塑料管壁上的蛋白结合位点，使细胞因子或重组蛋白不会黏于管壁，方可更好地保存蛋白溶液；

4.1 短期保存：在一般情况下，上文中建议的浓度是较高的。我们建议将该溶液用含载体蛋白（如0.1% BSA、10% FBS、5% HSA）的溶液进行稀释，分装存于4℃并于一周内用完，分装体积不要小于20μL。否则稀释后的细胞因子或重组蛋白很容易会粘附在管壁或瓶壁上，使得溶液中的细胞因子或重组蛋白的浓度下降，从而影响其生物活性；

4.2 长期保存：若配置的溶液无法一次用尽，我们建议用含载体蛋白（如0.1% BSA、10% FBS、5% HSA）的溶液进一步稀释，分装冻存于-20℃至-80℃，分装体积不要小于20μL；

4.3 在做无血清培养或动物的体内实验时，细胞因子中不能含有BSA，FBS或HSA等动物或人的成分，我们建议选用BETAGENE小包装产品，每次使用一支，用后即废弃。或者用含5%海藻糖（Trehalose）的溶液来稀释已溶解的细胞因子或重组蛋白，然后分装冻存，分装体积不要小于20μL。

重组蛋白的种属交叉活性

重组蛋白的种属交叉活性需要根据具体产品而定；建议尽量选择对应种属的重组蛋白。如实在无法匹配种属，以下信息供参考：

1. 大多数人细胞因子对小鼠细胞有效（仅少数例外，见3）；

2. 多数小鼠细胞因子对人细胞有效，但特异性可能不强。例如小鼠的表皮生长因子（EGF） 对人的表皮细胞有活性，对人的其他种类细胞可能也有作用；

3. 干扰素、GM-CSF、IL-3、IL-4具有种属特异性，即这类重组人细胞因子只能作用于人细胞，对小鼠和大鼠等种属无效，这类重组小鼠细胞因子也仅用于小鼠细胞，对人细胞无效；

4. 成纤维细胞生长因子 (FGFs)、神经营养素（Neurotrophins，如BDNGF、GDNF、CNTF、β-NGF等）、TGF-β 等高度保守，各种属间交叉活性强；

5. 请致电我们的400电话或联系我们的技术支持获得帮助。

重组蛋白的检测都有哪些？

1. 基因序列：经N端序列分析。必要时，使用SDS-PAGE，HPLC和质谱分析等方法与标准品进行比对；

2. 蛋白纯度：

   2.1 经SDS-PAGE

   2.2 HPLC分析

3. 生物活性：经相关的体外或体内生物活性检测，详见下文；

4. 蛋白含量：

   4.1 紫外分光光度

   4.2 BCA蛋白定量测定

   4.3 SDS-PAGE分析

   4.4 HPLC法与标准品比对

5. 内毒素含量：经动态LAL（西方鲎试剂）法或TAL（东方鲎试剂）法测定；

6. 无菌：所有蛋白溶液在分装冻干前经0.22um滤膜过滤除菌，在B+A级环境分装、冻干及封盖；

7. 分子量：SDS-PAGE分析；

8. 宿主蛋白残留：荧光染色；

9. 宿主DNA残留：ELISA试剂盒；

10. 支原体检测：支原体试剂盒。

    
    

重组蛋白的生物活性是什么？

蛋白质的生物活性是各种蛋白质功能的体现。或者您可以理解只有蛋白质有活性的概念，它才能执行它的功能。具有生物活性的蛋白质称为活性蛋白质，即具有生物活性的活性蛋白质。从理论上讲，天然蛋白都是活性蛋白，而重组蛋白并不总是活性蛋白，因为重组蛋白的产生是一个复杂的过程，其中许多因素对其生物活性至关重要，例如理想的表达系统、合适的表达载体、纯化等。

1. ED₅₀的计算：

BETAGENE Genetic的蛋白产品ED₅₀（即半数有效浓度，其定义是对特定细胞引起 50% 最大反应的蛋白浓度，单位为ng/mL）可在蛋白产品COA中获取，这种活性表示法仅适用于剂量反应曲线呈 S 形的细胞因子。将1 ng/mL ED₅₀ 定义为 1 unit，则产品生物学活性 Specific Activity 的换算公式如下：

Specific Activity（units/mg）= 1 × 10 ⁶  ÷  ED₅₀（ng/mL）

以上计算公式并不适用于International Units（IU）和ED₅₀的换算关系，我们建议采用国际标准品对比相同实验获得该蛋白的IU值。

2. 影响ED50的因素：

产品说明书中的实验方案只是确认该产品的ED₅₀，如果客户的实验类型与我们相同，则可以按照产品标定的生物活性进行实验；若实验采用了不同的细胞种类或方法，我们建议客户按照梯度浓度通过实验获得最佳ED50值，并依据此数值制定相应的实验方案以及产品的添加量。如对生物活性或实验方法有疑问，可联系我们的技术支持（support@betagene.com）。

什么是蛋白质的变性？

在一些理化因素的作用下，蛋白质的特定空间结构被破坏，导致其原有理化性质的改变和生物活性的丧失。这种现象称为蛋白质变性，这些蛋白质被称为变性蛋白质或非活性蛋白质。

蛋白质变性过程通常是不可逆的。变性蛋白质通常是固体，不溶于水和其他溶剂。它们也失去了原始蛋白质的特性。换句话说，变性蛋白质不具有生物活性，不再执行特定的生物学功能。对于酶来说，它会失去催化能力。变性的主要原因是热、紫外线、剧烈搅拌、强酸和碱。

务必注意，请避免反复冻融，因每次冻融均可能引起蛋白的部分变性。因此，我们建议分装的蛋白溶液冻融不要超过 1 次。

重组蛋白的共线生产如何解决？

我们设立了严格的质量体系，按照国家药品监督管理局发布的《药品共线生产质量风险管理指南》规范管理产品的生产，最大程度降低甚至杜绝共线生产导致的产品间的污染、交叉污染，保证产品的安全、有效和质量可控，确保客户安全地使用我们的产品。

重组蛋白的运输及储存方式？

由于每次冻融都会造成蛋白的部分失活，收到产品后请适量分装，务必注意，请避免反复冻融，因每次冻融均可能引起蛋白的部分变性。因此，我们建议分装的蛋白溶液冻融不要超过 1 次。溶解后如需更久地保存产品，请参考上文『产品的溶解』部分。

1. 短期储存：

   1.1 冻干粉产品比较稳定，室温下可存放3周，不影响活性。大于大多数蛋白，溶解后在4℃仅能短暂地保存1-2 周；

   1.2 溶液产品（如胰蛋白酶、核酸酶）已搭配了合适的缓冲液，须存放于-20℃。

2. 长期储存：

   2.1 自产品收到之日算起，冻干粉产品在-20℃至-80℃可稳定储存2年。且每管的体积不小于20μL，在-20℃至-80℃条件下可保存3-6个月。

   2.2 溶液产品已搭配了合适的缓冲液，在-20℃至-80℃可稳定储存1年；

3. 运输：

   BETAGENE的大部分重组蛋白产品为冻干粉，在室温环境中都是稳定的，一般采用 蓝冰或者室温运输。胰蛋白酶液体采用干冰运输。

其他问题

您对我们的产品有任何问题，请随时联系我们的售后部门（support@betagene.com或4009-204-254），我们将非常乐意解答您的问题。